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    色譜分析中出現鬼峰腫么辦?
    來源：實驗與分析 時間：2015-03-20 22:32:29 瀏覽：4144次

    本文授權轉載自實驗與分析

    色譜分析中出現鬼峰腫么辦?

    鬼峰產生的原因是多種多樣的，根據本人的經驗以及文獻報道，將原因歸納為以下幾個方面：
    1、流動相、樣品稀釋液、儀器或是容器中存在雜質，當梯度開始時由于有機相比例不高，洗脫能力不強，雜質在色譜柱柱頭富集，隨著流動相比例變化，洗脫能力增強，富集的雜質被洗脫，從而形成鬼峰。
    2、流動相脫氣不完全。空氣在有機相和水中的溶解度不同，當水和有機相混合時，氣泡就產生了
    3、操作問題
    情況梳理
    一


    1、試劑問題

    a) 有機溶劑

    甲醇制備工藝相對乙腈來說較為簡單，雜質含量也較少。但是由于甲醇紫外吸收范圍比乙腈廣，所以當使用紫外檢測器時，尤其是波長較低時，盡量使用乙腈作為有機相，用甲醇的話漂移太大。而用作梯度色譜的乙腈質量要求較高，一般用進口梯度色譜專用乙腈能夠很好的減少鬼峰的出現。

    b) 水

    很多單位用自制蒸餾水作為水相，但是結果并不是很好。原因就是一些低沸點的有機雜質并不能夠通過蒸餾除掉。有條件的盡量用HPLC級的純水，沒有條件的也可用娃哈哈或是屈臣氏等水代替，但是如果色譜條件比較嚴格也是有可能出問題的。

    c) 其它試劑

    緩沖鹽、TFA、EDTA等試劑也會對流動相造成很大的影響，盡量用純度高的試劑配制流動相。

    2、儀器問題

    a) 液相的流動相管路被污染。

    長時間的使用含水量較高的流動相(尤其是加入緩沖鹽的)，細菌就容易在管路中滋生，細菌的代謝產物或是細胞碎片能造成鬼峰。

    b) 輸送泵故障，造成系統壓力不穩，從而產生鬼峰。

    c) 單向閥堵塞，造成系統壓力不穩，從而產生鬼峰。早期島津的液相單向閥貌似不能用純乙腈作為流動相，現在應該已經得到改進。

    情況梳理
    二

    1、 在線脫氣機脫氣不完全。

    2、 兩種流動相的有機相比例相差太大。例如A為100%水，B為100%乙腈。在梯度條件允許的情況下盡量減少兩中流動相之間的差距，降低空氣在兩中流動相中溶解度的差異，從而減少氣泡的產生。

    3、 流動相配置好后預先超聲脫氣。

    情況梳理
    三

    1、流動相配置過程中受到污染


    a) 盛放流動相的容器或是量具受到污染。

    這種污染可能來自于洗滌劑、鉻酸洗液或是其他實驗人員用完后的殘留雜質。流動相容器的清洗一般用干凈的水+有機溶劑涮洗就行，過多的清洗步驟反而可能造成二次污染。有時流動相容器的塑料蓋碎片都有可能是雜質的來源。


    b) pH計。

    很多pH計以聚碳酸酯作為外殼，然而聚碳酸酯是可以溶于有機溶劑的，所以盡量使用玻璃pH計來測量流動相的pH。


    c) 濾膜。

    劣質的或者型號錯誤的濾膜往往是鬼峰出現的原因。


    d) 放置時間過長。

    流動相在空氣中暴露時間過長，就可能吸收空氣中的有機雜質，有時流動相中的添加劑，例如TFA，時間長了會氧化從而產生雜質。

    2、儀器樣品稀釋液與流動相極性或者pH相差太大。

    這也是導致鬼峰的原因之一，這種問題很有可能導致樣品分為兩個不同的階段出峰，從而產生雙峰或者多峰。

    免責聲明：本資源來源于實驗與分析，版權歸原作者所有，本文僅作交流學習之用，不作任何商業用途，若有侵權，請聯系刪除，謝謝理解！

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    12條評論
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    全部 3小時前 四川
    文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字，很多小語種，有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
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