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    實驗筆記丨免疫組織化學染色（IHC）步驟詳解
    來源： 時間：2022-11-02 15:34:07 瀏覽：4398次

    免疫組織化學（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質）。


    包埋組織

    在４％多聚甲醛溶液中固定組織48小時后，放入一次性組織包埋盒中脫水，浸蠟后包埋。


    修片


    修剪石蠟切片，直至將石蠟切片修到大部分組織在切面上。

    組化


    3.1 蠟塊制備

    將組織蠟塊提前泡到冰水混合物中使其變軟，將組織蠟塊放在切片機上切出５微米的切片，60°Ｃ烘片１小時。


    3.2 脫蠟

    １）將切片放到60°Ｃ烘箱中烘片４ｈ以上。

    ２）在二甲苯I里置入片子，持續0.5 h，再置于二甲苯II，依然持續0.5 h。


    3.3 水化

    １）通過酒精，浸泡切片，酒精濃度不一，分為７０％、８０％、９０％、９５％、１００％，各濃度浸泡時間也有所差異，前３個濃度都是各自浸泡２分鐘，后面兩個濃度分別浸泡5分鐘、10分鐘。

    ２）最后將片子放到雙蒸水中浸泡２min。


    3.4 組化

    １）封閉處理：選擇內源性過氧化物酶阻斷劑，處理時間為20 min。

    ２）用雙蒸水浸泡三次，單次時間5 min。

    ３）抗原修復：準備pH＝6.0的10 nM檸檬酸抗原修復液400-600 ml，把片子放到里面，用保鮮膜封住燒杯口防止沸騰溢出。之后放到微波爐中用高火加熱10 min。

    ４）加熱后用雙蒸水補齊液面，在微波爐中加熱40 min（中低火至解凍之間），每隔10 min用雙蒸水補齊液面。

    ５）修復結束后，放到室溫下，使其自然冷卻。

    ６）DDW清洗180＂之后，通過PBS清洗，３分鐘／次，進行三次。

    ７）通過一抗封閉，保持４°Ｃ，第二天進行溫度回升，為37°Ｃ，然后通過PBS清洗，持續５分鐘。

    ８）在其中添加反應增強液，然后孵育，室溫條件，持續20 min，再通過PBS清洗，３分鐘／次，進行三次。

    ９）加入增強酶標山羊抗小鼠／兔IgG聚合物，然后孵育，室溫條件，持續20 min，再通過PBS清洗，3分鐘／次，進行三次。

    1０）滴加DAB顯色液（現用現配、比例1:19），室溫孵育2-10 min（根據不同的抗體自行選擇染色時間）。用自來水輕輕沖洗掉。

    １１）復染：加蘇木精染色50 s。用DDW，3 min，PBS，５min X３次。

    １２）脫水：將片子依次浸泡到不同濃度的酒精梯度中：７０％，ｌｍｉｎ—８０％，ｌｍｉｎ—９０％，1 ｍｉｎ—９５％ Ｉ，５ｍｉｎ—９５％ II ，５ｍｉｎ—１００％Ｉ，５ｍｉｎ—１００％ II，５ｍｉｎ。

    １３）透明：利用二甲苯Ｉ、二甲苯 II 進行處理，每次處理持續20 min。

    １４）中性樹脂封片，中性樹脂，加蓋玻片(組織部位切勿殘留小氣泡)，自然晾干。

    來源：科研日精進

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    12條評論
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    全部 3小時前 四川
    文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字，很多小語種，有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
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