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HE染色實(shí)驗(yàn)原理與步驟講解

來源：時(shí)間：2022-12-30 09:32:04 瀏覽：23403次

一、原理

蘇木精-伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining )，簡稱HE染色。HE染色是組織學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基礎(chǔ)、使用最廣泛的技術(shù)方法之一。

蘇木精染液為堿性，可以將組織的嗜堿性結(jié)構(gòu)（如核糖體、細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中的核糖核酸等）染成藍(lán)紫色；伊紅為酸性染料，可以將組織的嗜酸性結(jié)構(gòu)（如細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，包括路易體、酒精小體以及細(xì)胞質(zhì)的大部分）染成粉紅色，使整個(gè)細(xì)胞組織的形態(tài)清晰可見。組織切片方法是教學(xué)、科研、病理檢驗(yàn)工作中非常常用的一種試驗(yàn)方法，HE染色則是在制作切片的過程中最常用的染色方法。

二、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本

石蠟切片、冰凍切片

三、實(shí)驗(yàn)試劑材料

多聚甲醛、酒精、二甲苯、石蠟、蘇木精水溶液、酒精伊紅染色液、生理鹽水、蒸餾水、PBS等實(shí)驗(yàn)必備溶劑

四、實(shí)驗(yàn)步驟

（1）樣本組織固定與切片：首先將組織樣本進(jìn)行常規(guī)的石蠟包埋。在模具中加入液態(tài)石蠟，將待包埋的組織樣本放入石蠟中，確保組織位置規(guī)整。補(bǔ)充少許液態(tài)的石蠟后，進(jìn)行降溫冷凍，使石蠟變?yōu)楣虘B(tài)達(dá)到組織固定的效果，然后使用石蠟切片機(jī)進(jìn)行切片，厚度在４-８um左右。將切完后的組織切片放入載玻片上使用40℃溫水浸泡使組織充分伸展。

（2）組織樣本脫蠟：將待測組織樣本切片放于二甲苯中，充分浸泡10min，浸泡完后更換二甲苯繼續(xù)浸泡10min，目的是使用二甲苯將切片中的石蠟溶解，這樣可以在進(jìn)行染液染色的時(shí)候，染液可以充分進(jìn)入組織種，同時(shí)，二甲苯還可以起到透明的作用，使切片更容易觀察。

（3）組織樣本水化：將浸泡過二甲苯的待測組織樣本先放入無水乙醇中浸泡5min，使脫蠟時(shí)用的二甲苯可以被洗脫出去，使水可以進(jìn)入組織中；再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡５min以達(dá)到充分水化的效果。

（4）組織切片蘇木素染色、分化與反藍(lán)：將水化后的組織樣本的切片使用PBS溶液浸泡清洗，每次浸泡５min，總共清洗３次。之后用移液槍吸取已經(jīng)預(yù)先配制好的蘇木素染色液，每個(gè)組織切片滴加100ul，充分染色10min。染色完畢后使用蒸餾水洗去多余的蘇木素染色液。然后再使用1%的鹽酸乙醇進(jìn)行分化，使細(xì)胞核中結(jié)合過多的染液和細(xì)胞漿中的多余的染液被除去。分化完成后，再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。為了使蘇木素染藍(lán)色，使用弱堿性的促藍(lán)液加入組織切片中，讓細(xì)胞核染藍(lán)色。反藍(lán)結(jié)束后先用清水進(jìn)行清洗，再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。

（5）組織切片伊紅染色與脫水：向上一步驟的組織樣本切片中加入伊紅染液，并使組織可以充分染色3min，染色完畢后，再將組織切片進(jìn)行梯度脫水，分別使用濃度為80%、95%以及無水乙醇進(jìn)行操作。80%的乙醇脫水5s，95%乙醇脫水2min，無水乙醇脫水2min。

（6）組織樣本切片風(fēng)干封片：將脫水后的組織樣本切片使用二甲苯浸泡２次，每次持續(xù)４min，然后將組織樣本切片干，并使用中性樹膠封片。

（7）最后在顯微鏡下觀察并拍照

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