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石蠟切片技術(shù)里常用的染色法——HE染色

來(lái)源：時(shí)間：2024-11-07 10:14:41 瀏覽：5251次

石蠟切片技術(shù)里常用的染色法——HE染色

石蠟切片技術(shù)是一種廣泛應(yīng)用于病理學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域的制片技術(shù)，通過(guò)對(duì)生物組織進(jìn)行固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、貼片、烤片等一系列處理，制備出可供顯微鏡觀察的薄切片；在石蠟切片的觀察中，染色是至關(guān)重要的一步，它可以使組織結(jié)構(gòu)更加清晰，便于研究人員進(jìn)行觀察和分析；HE染色，即蘇木精-伊紅染色，是石蠟切片技術(shù)中最常用的染色方法之一。

一、原理

HE染色利用蘇木精（Hematoxylin）和伊紅（Eosin）兩種染料的親和力不同，對(duì)細(xì)胞的不同成分進(jìn)行著色；蘇木精是一種堿性染料，能夠與細(xì)胞核中的酸性物質(zhì)（如核酸）結(jié)合，使細(xì)胞核呈藍(lán)色或紫色；伊紅是一種酸性染料，能夠與細(xì)胞質(zhì)中的堿性物質(zhì)（如蛋白質(zhì)）結(jié)合，使細(xì)胞質(zhì)呈紅色或粉紅色。

二、步驟

1.脫蠟：將石蠟切片放入二甲苯中，去除切片上的石蠟，使其透明。

2.梯度酒精脫水：將脫蠟后的切片依次放入高濃度到低濃度的酒精中，以去除二甲苯，使切片適應(yīng)水環(huán)境。

3.水洗：用蒸餾水清洗切片，去除殘留的酒精。

4.蘇木精染色：將切片放入蘇木精染液中，通常在室溫下染色5-10分鐘。

5.水洗：用蒸餾水清洗切片，去除多余的蘇木精染液。

6.分化：將切片放入1%的鹽酸酒精中分化，直至細(xì)胞核顏色清晰，背景幾乎無(wú)色。

7.水洗：再次用蒸餾水清洗切片，停止分化。

8.返藍(lán)：將切片放入弱堿性溶液中（如碳酸鋰溶液），使細(xì)胞核顏色更加鮮艷。

9.伊紅染色：將切片放入伊紅染液中，通常染色1-3分鐘。

10.水洗：用蒸餾水清洗切片，去除多余的伊紅染液。

11.梯度酒精脫水：將切片依次放入低濃度到高濃度的酒精中，去除水分。

12.透明：將脫水后的切片放入二甲苯中，使其透明。

13.封片：用中性樹(shù)膠或加拿大樹(shù)膠封片，覆蓋玻片。

三、注意事項(xiàng)

1.染液濃度和染色時(shí)間：染液濃度和染色時(shí)間需要根據(jù)組織類(lèi)型和切片厚度進(jìn)行調(diào)整，以達(dá)到最佳染色效果。

2.分化時(shí)間：分化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免過(guò)度分化導(dǎo)致細(xì)胞核顏色過(guò)淡或消失。

3.返藍(lán)時(shí)間：返藍(lán)時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免細(xì)胞質(zhì)著色受到影響。

4.切片脫水：在梯度酒精脫水過(guò)程中，應(yīng)確保切片完全脫水，以免影響透明和封片。

5.封片：封片時(shí)，應(yīng)避免氣泡的產(chǎn)生，確保切片與蓋玻片之間無(wú)空氣。

四、應(yīng)用

HE染色因其簡(jiǎn)單、快速、結(jié)果可靠等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于病理學(xué)診斷、生物學(xué)研究等領(lǐng)域；通過(guò)HE染色，可以清晰地觀察到細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)，對(duì)于判斷組織的正常與否、病變性質(zhì)和程度具有重要意義。

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